母产对原料需求旺盛

生物柴油是株油脂酵新能源领域的研发热点。与普通柴油相比，母产生物柴油具有芳烃含量低、油特研究十六烷值高、对比高闪点、株油脂酵低温启动性较好等优点，母产是油特研究一种理想的柴油替代品。但以动、对比植物油脂为原料进行生物柴油规模化生产还存在诸多问题。株油脂酵目前世界各国生物柴油产业发展迅速，母产对原料需求旺盛，油特研究打破了原有的对比供需平衡，因此要进一步促进生物柴油产业的株油脂酵可持续发展，关键是母产能够找到廉价且量大的油脂原料。

微生物油脂（Microbialoil），油特研究是产油微生物在一定条件下合成并储存在体内的油脂，产油微生物包括酵母、丝状真菌、细菌、微藻等。其中产油酵母种类多，其所产脂肪酸组成适合作为生物柴油的原料，引起各国学者的广泛关注和研究。本研究旨在同一条件下对比3株产油酵母的产油能力和所产油脂的脂肪酸组成，为其进一步的工业化开发应用提供有价值的参考。

1 材料与方法

1.1 菌种

禾本红酵母（Rhodotorulagraminis），皮状丝孢酵母（Trichosporoncutaneum），圆红冬孢酵母（Rhodosporidiumtoruloides），购于中国普通微生物菌种保藏中心。

1.2 培养基

浸粉10，琼脂粉18，pH6.0；种子培养基为液体YEPD培养基；限氮培养基（g/L）：葡萄糖70，酵母浸粉0.75，（NH₄）₂SO₄0.1，KH₂PO₄0.4，MgSO₄·7H₂O1.5。以上培养基均在115℃下灭菌15min。

1.3 酵母培养方法

将斜面保藏的3株产油酵母分别接种于YEPD种子培养基中，28℃，200r/min培养24h，以1%（v/v）的接种量接种于YEPD液体培养基中（药瓶装液量为1/5），相同条件下培养28h，得到3株产油酵母的种子液。将3株产油酵母种子液分别以10%（v/v）的接种量接种于限氮培养基中，于28℃，200r/min摇瓶培养至还原糖浓度不降低时结束发酵，每隔24h取样测定其还原糖浓度、生物量和油脂含量，每组试验设置两个平行样。

1.4 分析方法

葡萄糖浓度测定采用DNS法，生物量测定采用干重法，油脂提取和测定采用酸热法抽提干菌体内的油脂。参照文献方法制备微生物油脂的脂肪酸甲酯，采用气质联用仪（GCMS）分析其组成。

2 结果与讨论

2.13 株油脂酵母的产油对比

3株油脂酵母的产油对比见图1。

由图1可知，禾本红酵母和皮状丝孢酵母对葡萄糖的利用规律相似，圆红冬孢酵母葡萄糖利用速率最大，120h后糖浓度降为0左右。圆红冬孢酵母的生物量96h时可达19.44g/L。禾本红酵母到发酵144h后油脂产量达5.0g/L以上。皮状丝孢酵母油脂产量达7.0g/L左右，圆红冬孢酵母在96h时油脂产量为12.5g/L。由此可见油脂积累能力，圆红冬孢酵母＞皮状丝孢酵母＞禾本红酵母。由表1可看出，圆红冬孢酵母的油脂得率显著高于其他两株产油酵母，这说明圆红冬孢酵母能将培养基中的葡萄糖高效地转化为油脂。

2.23 株产油酵母的脂肪酸组成对比

明确油脂的脂肪酸组成是决定其进一步开发和应用的关键。3种油脂酵母脂肪酸组成如表2所示。禾本红酵母脂肪酸种类最少，圆红冬孢酵母次之，圆红冬孢酵母脂肪酸种类最多。圆红冬孢酵母占比最大的为油酸、棕榈酸和硬脂酸；皮状丝孢酵母所产油脂中的油酸、棕榈酸和亚油酸含量最高；禾本红酵母脂肪酸组成中也是油酸、棕榈酸和亚油酸含量最高，但比例上存在明显差异，与文献报告结果相似。由此可见，3株油脂酵母所产油脂主要组成与一般的植物油油脂组成相似。

3 结论

在葡萄糖限N培养基中，圆红冬孢酵母的油脂得率显著高于其他两株产油酵母。3株油脂酵母脂肪酸主要为油酸、棕榈酸、亚油酸和硬脂酸，比例有显著差别，与一般的植物油组成相似，可作为生物柴油的原料。

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